改良Lowry法蛋白定量试剂盒
K1023-1000次
描述：许多年来，Lowry法是最常用也是被引用次数最多的蛋白质定量方法。其原理是在碱性条件和福林酚Folin-Ciocalteu Reagent存在下，铜离子与蛋白质形成可溶性兰色复合物，在750 nm有最大光吸收值。Lowry法的优点是灵敏度高，对脂质、SDS等干扰物质不甚敏感。经典Lowry法的主要缺点是，每次蛋白定量之前必须用两种不同的试剂A和B (Reagent A and B)新鲜配制碱性铜试剂(Reagent C)。碱性铜试剂(Reagent C)不稳定因而必须每天新鲜配制；另外，经典Lowry法产生的蛋白颜色复合物稳定性较差，在反应20-120分钟内变化9.2%；蛋白浓度低于15µg/ml时标准曲线的重复性较差；
本试剂盒采用改良的Lowry法，用单一添加有稳定剂的碱性铜试剂代替经典Lowry法的试剂A、试剂B、和试剂C。这种改良碱性铜试剂在室温下稳定12个月以上；测定反应产生的铜蛋白-蓝色复合物相当稳定，在2小时内的变化不超过0.3%；反应曲线几乎100%与原有方案吻合，重复性佳。因而改良Lowry法蛋白定量试剂盒#P1512，与BCA法蛋白质定量试剂盒#P1511一样，具有非常好的试剂稳定性、检测灵敏度、和重复性，并且测定过程变得十分简捷，是经典Lowry法忠实用户的理想选择。测定范围1-2000 µg/ml。可进行1000次微量测定及200次1-ml比色杯测定。
Kit Contents (1000次微量测定或200次1-ml比色杯测定)
Modified Lowry Protein Assay Reagent, 200 ml, containing cupric sulfate and sodium tartrate. 4ºC
2N Folin-Ciocalteu Reagent, 10 ml, 4ºC
Albumin Standard, 4 mg/ml, 1 ml BSA in 0.9% saline and 0.05% sodium azide, －20ºC
Storage: Upon arrival store at 4ºC. Product shipped at ambient temperature. Discard any kit reagent that shows
discoloration or reddish precipitate. This product is guaranteed for one year from the date of purchase when
handled and stored properly.
表1 标准测定和微板测定方案的加样量和比例
|
|
微板(microplate)测定方案 |
标准比色杯测定方案 |
|
孔数 |
蛋白浓 |
标准或待 |
Modified |
Folin |
标准或待 |
Modified |
Folin |
|
|
度 |
测样品体 |
Lowry |
phenol |
测蛋白体 |
Lowry |
phenol |
|
|
(µg/ml) |
积 (µl) |
(µl) |
(µl) |
积 (ml) |
(ml) |
(ml) |
|
1 |
7.8 |
20 |
220 |
10 |
0.2 |
1 |
0.05 |
|
2 |
15.625 |
20 |
220 |
10 |
0.2 |
1 |
0.05 |
|
3 |
31.25 |
20 |
220 |
10 |
0.2 |
1 |
0.05 |
|
4 |
62.5 |
20 |
220 |
10 |
0.2 |
1 |
0.05 |
|
5 |
125 |
20 |
220 |
10 |
0.2 |
1 |
0.05 |
|
6 |
250 |
20 |
| | 
