常规考马斯亮蓝SDS-PAGE凝胶蛋白质染色,需要长时间的凝胶固定、染色和脱色步骤,耗费很长的时间并且灵敏度低。银染方法虽然灵敏度高,但所需试剂复杂并且有毒有害,操作步骤繁琐,难以控制获得好的染色效果。
科达宏伟基因技术公司开发的新一代SDS-PAGE凝胶蛋白质染色系统,是迄今世界上最方便的商业化快速凝胶染色试剂。凝胶在甲醇-醋酸固定30-60分钟,加入染色试剂5-15分钟后肉眼即可直接看到紫蓝色的蛋白条带。由于可用肉眼观察蛋白条带,实验人员可在直视下根据需要随时终止染色,非常方便和直观。这一染色系统不需要进行脱色步骤,大大简化缩短了凝胶蛋白染色步骤和时间。在快速便利的同时,该染色试剂检测蛋白质的检测灵有极大的提高,可染色少至10~100 ng的单一蛋白条带,比普通考马斯亮蓝染色灵敏10倍以上,同时蛋白染色条带更锐利,分界更清晰。条带中的蛋白含量与颜色深度在2-2000 ng范围内呈良好的线性关系,比考马斯亮蓝凝胶蛋白染色的线性关系范围更宽。
n 新一代SDS-PAGE凝胶染色方法
n 凝胶固定30-60分钟,染色5-15分钟
n 肉眼可直接观察蛋白条带
n 无需脱色
n 灵敏度(10~100 ng)高于考马斯亮蓝染色
n 条带更锐利分界更清晰
n 条带染色深度与蛋白含量(2-2000 ng)呈线性关系
n 安全无特殊毒性
染色步骤
配制30%甲醇-7%醋酸水溶液。浓度误差<0.5%
1. 每一小胶(<1 mm)加入30-50 ml甲醇-醋酸溶液旋转洗涤固定30分钟。洗涤时间依赖于凝胶的大小和厚度。厚胶(>1 mm)需要洗涤60分钟,或30分钟洗涤两次。大尺寸凝胶应该在更多的洗液中洗涤60分钟。充分彻底的洗涤可以防止加入染液时出现沉淀,并增加蛋白染色灵敏度。
2. 倒掉洗液,加入30%甲醇--7%醋酸溶液25 ml (每一个标准小胶)。
3. 加入0.25 ml 溶液A,加入0.25 ml 溶液B。混匀并不时晃动。5-15分钟后肉眼即可直接看到紫蓝色的蛋白条带。
4. 在直视下根据需要随时结束染色。弃染液,用水冲洗即可终止染色。
5. 染色后凝胶可存于30%甲醇-7%醋酸溶液,或直接进行照像、扫描、干胶。
储存:密封保存于室温一年。安全性:染色试剂中含有甲醇和乙醇。