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生化测定试剂盒


科达宏伟 | K1016 | Western Blot膜再生液-I

Western Blot膜再生液-I   

K1016-100ml

K1016-500ml

 

描述:允许对同一张膜进行多次Western Blot检测。在室温条件下,将用过的膜浸泡在膜再生液处理30分钟,选择性清除与膜抗原结合的第一抗体及第二抗体,但不影响电转移到膜上的蛋白。随后,可以使用不同的抗体进行下一轮Western Blot实验,因而可利用同一张膜进行多次蛋白检测。不仅适宜用少量样品多次检测多种不同蛋白,即使样品量并不匮乏,采用这种多次检测同一张膜上的蛋白的策略,能省去给药处理、蛋白电泳和膜转移等耗费性步骤。

Western Blot膜再生液的特点是:无毒无味无害,室温保存和使用;可对同一张膜进行10次以上的Western Blot检测。

适用:硝酸纤维素膜或PVDF膜。使用前膜可以保存在PBSTBS缓冲液,膜也可以室温干燥保存数月。干的PVDF膜应该先用乙醇泡5分钟。

使用方法

1. 将膜充分浸泡于适当体积的再生液中,室温孵育15~30分钟并不时晃动。孵育时间的长短应参考后面的说明进行优化。洗脱某些抗体需要较长的时间如30~60分钟。

2. 用镊子取出膜,用自备Western Blot洗涤缓冲液快速淋洗膜一次,然后洗膜5分钟。

3. 此时膜上抗体已去除膜已经再生。用脱脂奶粉或BSA封闭,进行下一轮Western Blot实验。

储存:室温

安全性:无毒无味。按照普通化学品安全规范进行操作和处置。

说明:

1. 膜再生或Stripping的实质是在不影响膜上结合的抗原的条件下,将与抗原分子结合的一抗和二抗洗脱下来。有许多因素影响抗体从膜洗脱,如膜类型、抗体类型和浓度及其与抗原结合特性。按下面的说明优化再生液中孵育膜的时间至关重要。

2. 确定膜上抗体是否去除与优化再生液中孵育膜的时间:用ECL荧光工作液孵育再生后的膜约1分钟,然后进行X光胶片曝光并显影,可确定膜上的抗体是否完全去除。如胶片上显示条带,表明抗体未完全去除,应继续将膜浸泡在再生液中孵育另外30~60分钟。然后再次ECL 检查膜上抗体是否去除。重复此步骤直到抗体完全去除并确定最佳孵育时间。

3. 由于至今尚不清楚的原因,使用脱脂奶粉封闭的膜要比使用BSA封闭的膜上的抗体更容易被Strip下来。因此准备进行Strip的膜,应该使用脱脂奶粉而不是BSA封闭。

4尽量避免使用干燥保存的膜,干的膜上的抗体很难被Strip 干净