描述：线粒体参与能量代谢过程，参与细胞凋亡与老化等信号转导过程，参与退行性疾病如帕金森氏病，肿瘤等病理过程。线粒体/胞浆分离试剂盒 (Mitochondria Isolation Kit)用于从组织或培养细胞中分离线粒体和胞浆成分。加入缓冲液匀浆破碎组织或培养细胞，经过数次800g和12000g离心，在60分钟内即可分离出完整的线粒体和胞浆成分。制备的线粒体具有生物学活性，可进行各种功能研究如酶学测定。更可用于Western Blot、2D-胶、线粒体蛋白或DNA提取、蛋白质组学等研究。
组成：Mito-Cyto Isolation Buffer 90 ml for 50 preparation, 180 ml for 100 preparation。
储存：短期4 ºC，中长期−20 ºC。
适用：从组织、培养细胞制备线粒体。
制备程序
1. 组织匀浆：称取50-200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS冲洗，用剪刀剪为0.5cm2碎块放入小容量玻璃匀浆器内。估计组织块总体积。加入1.5 ml冰预冷的Mito-Cyto Buffer。用间隙严密的研杵上下研磨组织20次。
培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800 × g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要2-5 × 107个细胞。加入1.5 ml冰预冷的Mito-Cyto Buffer重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内。用间隙严密的研杵研磨细胞30-40次。
2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管，800 × g 离心5 min 4 ºC。细胞核、大的膜碎片、未裂解细胞等在管底。
3. 收集上清液并转移到新的离心管。再次800 × g 离心5 min at 4 ºC，弃沉淀。
4. 将上清液转移到新的离心管。12,000 × g 离心10 min 4 ºC。离心后的上清含胞浆成分，可以收集之用于对照实验。线粒体沉淀在管底。
5. 洗涤线粒体：加入0.2 ml Mito-Cyto Buffer，轻弹管底重悬线粒体沉淀；12,000 × g 离心10 min 4 ºC。弃上清，线粒体沉淀在管底。
6. 用Mito-Cyto Buffer或合适的自备反应缓冲液重悬线粒体沉淀，50 µl/每100 mg组织，或100 µl/5 × 107个细胞。测定蛋白浓度。立即使用或−70 ºC保存。如进行Western Blot或蛋白质组学研究，可直接用相应的缓冲液重悬线粒体。
注意：
1. 为保证获得完整的线粒体，第一是全程低温操作，将样品管放在冰水浴而不是碎冰块中。第二是快速。微量制备比大规模制备操作更方便和快速，因而更容易获得完整的线粒体。第三，在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备线粒体的最关键环节。用1-3 ml小容量玻璃匀浆器(而不是其它破碎装置)上下研磨培养细胞30-40次。破碎效果与细胞类型有关；与组织块相比，贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁。玻璃匀浆器须配套选用间隙严密的研杵，其特征是将研杵插入匀浆器套管后，可提起研杵而套管不会脱落。正确的研磨不是旋转研杵，而是上下缓慢推拉研杵实施机械破碎，且研杵每离开或进入匀浆器长玻璃管口导致压力剧变，使得破碎更为有效。在相差显微镜下检查未裂解细胞应在~50%左右即可。过度研磨将破坏线粒体，但研磨不足将降低线粒体的得率。
2. 不同的离心机可据以离心力g计算正确的离心速度，否则将导致不纯。
3. 进行Western Blot和2D-胶电泳，可自配1 x SDS-PAGE样品缓冲液裂解线粒体；也可用Mito-Cyto Buffer重悬线粒体，加入自配的2~4 x SDS-PAGE样品缓冲液。
4. 细胞色素C氧化酶可用作线粒体的标志酶。
