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生化测定试剂盒


科达宏伟 | K1001 | SuperECL Plus超敏发光液

SuperECL Plus超敏发光液   

K1001-25ML

K1001-100ML

K1001-250ML

 

描述:SuperECL Plus超敏发光液直接或间接检测与辣根过氧化物酶HRP关联的蛋白或核酸底物。这一独特的发光底物系统是目前最灵敏的商业化荧光ECL检测试剂,具有极高灵敏度和高信噪比可检测10-100 fg抗原(#P1010);发光迅速,荧光可使X光胶片感光达12小时以上,特别适用于痕量蛋白或核酸检测。同时该试剂允许使用更高的抗体稀释倍数,(1:2000-1:10000),极其节省抗体。

用途:用于HRP标记抗体的Western BlotHRP标记探针的核酸杂交。

储存:oC密封避光保存一年以上。然而25 oC室温放置数月依然如新。

安全性:无特殊毒性,按普通化学品处理。

使用方法:

1. 常规电泳、转膜、HRP标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。核酸杂交膜用HRP标记探针杂交,洗膜。

2. 洗涤膜上的HRP标记二抗,新鲜配制发光工作液:分别取等体积的溶液AB混合,放置使之升到室温否则会减弱荧光强度。建议立即使用工作液室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

3. 用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入并与发光工作液(0.125ml发光工作液/cm2)充分接触。室温孵育3分钟,准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。

4. 用镊子夹起膜,搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。

5. X光胶片暗盒内面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将杂交膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹杂交膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖杂交膜的保鲜膜固定在暗盒内,最好蛋白带面向上。

6. 在黑暗中放入X光胶片,分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。

注意事项:

1. 步骤1-5可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。

2. 长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。 

3. 发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。

4. 由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000-1:4000,二抗1:2000-1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败!

5. 某些市售保鲜膜包裹印迹膜时会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜,例如克林莱牌子保鲜膜。

6. 使用肉眼可见的预染色蛋白Marker(#P1100,#P1110)和荧光-放射自显影曝光标签(#P2010)可帮助确定胶片上条带的准确位置和大小。

7. NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%