淋巴细胞分离液人LymphocyteSeparation Medium uman)
H1008-100ML
描述：聚蔗糖商品名为Ficoll 400，泛影葡胺是临床使用的造影剂。二者组成的淋巴细胞分离液(Lymphocyte Separation Medium)具有低粘度、低渗透压、无毒等特点，因而在过去几十年里一直是分离血液单个核细胞(包括淋巴细胞和单核粒细胞)的标准操作方法。分离时将淋巴细胞分离液置试管底层，上面铺加抗凝全血，两者形成一个清晰的界面。室温水平低速离心后出现几个不同层次的液体和细胞带。红细胞和多核粒细胞密度大于分层液而沉积于管底。血小板和单个核细胞与分层液密度相当，在血浆层和分离液的界面形成白膜状条带，吸取该层细胞洗涤去除血小板得到纯净的单个核细胞。其中单核粒细胞纯度~95%，淋巴细胞纯度90~95%，得率约80%以上其高低与室温有关，分离温度低于10ºC或超过25ºC会降低细胞得率。
人与不同动物血中单个核细胞对分离液的密度要求各不相同。我们提供两种密度的淋巴细胞分离液：淋巴细胞分离液Lymphocyte Separation Medium (Human)，用于分离人血液单个核细胞/淋巴细胞。淋巴细胞分离液Lymphocyte Separation Medium (Animal)，用于分离小鼠、大鼠、豚鼠、兔、鸡、猫、牛的血液单个核细胞/淋巴细胞。
产品信息：
100 ml淋巴细胞分离液Lymphocyte Separation Medium (Human)，目录号H1008，用于分离人血。
100 ml淋巴细胞分离液Lymphocyte Separation Medium (Animal)，目录号H1009，用于分离动物血。
均含Ficoll-400和泛影葡胺，pH8.0。高温除菌。避光2-8 ºC稳定2年。
操作方法
1. 取新鲜血液，用肝素或枸橼酸钠或EDTA抗凝。或者，取血后静置自然沉降1h，取上层血浆及交界面的细胞。
2. 用等体积PBS或0.9% NaCl稀释血液或血浆。1:1稀释血液可降低红细胞的凝聚，提高淋巴细胞收获量。
3. 取3 ml淋巴细胞分离液加入离心管管底，并升温到室温。
4. 用巴斯德玻璃吸管吸取6 ml稀释后的血液样品，或者取3 ml未抗凝全血或未稀释血浆，延管壁缓慢铺到淋巴细胞分离液上面，勿打乱液层界面。
5. 水平转子离心2000 rpm/min或700g离心20 min，室温约20 ºC。存放2h以上的血液应离心30 min。
6. 离心后管底是红细胞，中间层是分离液，最上层是血浆。血浆层与分离液之间是一薄层较致密的白膜，含单个核细胞(包括淋巴细胞和单核粒细胞)。推荐用吸管直接插入到单个核细胞层并吸取该层，放入另一试管中。
7. 加10 ml生理盐水稀释分离的淋巴细胞，250g离心10 min，弃上清。重复洗涤1-2次，除去血小板和抗凝物质。最后用PBS或合适的培养基将淋巴细胞稀释备用。
注意事项
1. 为保持淋巴细胞的活性，应该采血后马上进行分离。分离的细胞层实际上是单个核细胞层，包括淋巴细胞和单核细胞。
2. 小动物如小鼠大鼠可断头取血，抗凝，用PBS 1:1稀释血液增加回收率。分离时按照比例，每一份淋巴细胞分离液加两份稀释后的血液。如果操作无误但离心后的界面之间不能形成单个核细胞层，可能是血液量不足，或未使用新鲜血液，或者不适于分离该种动物血液。
参考文献：
1. Boyum A. (1968): Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J. Clin. Lab. Invest. 21, Suppl. 97.
2. Harris R. & Ukayiofo EV. (1969): Rapid preparation for lymphocytes for tissue typing. Lancet 327, 7615.
3. Boyum, A., Isolation and removal of lymphocytes from bone marrow of rats and guinea-pigs., Scand J. Clin. Lab. Invest., 21, Suppl.97, 91-109 (1968).
| 
