H1005 | 组织冰冻切片包埋剂(TissueCT-FreezeMedium)

组织冰冻切片包埋剂(TissueCT-FreezeMedium)   H1005-100ML      描述：冷室、组织块、包埋剂、切片刀之间的温度平衡于优化的切片温度(optimum cutting temperature, OCT)附近，是获得高质量冰冻切片的保证。不同的组织因构成和脂质各异而具有不同的OCT温度。冰冻组织在接触刀刃的瞬间，局部温度短暂升高shatter发生局部融化；随后切开的组织薄片暴露于冷室被再次骤冷冰冻。这种融化-冰冻温度变化是切片皱褶或断裂的内在原因，在此基础上切片的软硬度和厚薄度进一步影响皱褶产生(1)。在切片过程中，冰冻包埋剂也须历经与组织类似的温度变化，这就要求包埋剂必须具有与组织块相近的冰冻速度和软硬韧度。 Tissue OCT-Freeze Medium是由高分子聚合物组成的无色透明粘稠液体，骤冷时固化，其冰冻速度和软硬韧度与组织细胞相近，因而能保证优化的OCT温度，并具有支持填充、减少皱褶和断裂等作用。可任意添加于切片机的样品架以支持和固定样品。与广为使用的Tissue-Tek OCT Compound包埋剂相比，普利莱的包埋剂的突出优点支持超薄和超厚(2~100 µm)冰冻切片并减少皱褶和断裂。不影响后续免疫组化、原位杂交、病理染色操作，并可经由水或PBS冲洗完全去除，是理想的组织冰冻包埋剂。 组成：120 ml，4ºC 1年。可常温放置。常温和4ºC为无色透明粘稠液体，温度降低时逐渐变粘稠并固化。 适用：组织和培养细胞的冰冻包埋固定。用于临床快速病理染色诊断、免疫组化、原位杂交。 使用前标本准备 冰冻切片标本可采用 (1) 新鲜组织，特点是快，但未用完的包埋组织块不能保存；(2) 经典使用10%甲醛或4%多聚甲醛室温2~10分钟固定过的组织，优点是既不影响后续步骤，包埋组织块一又可长期冰冻保存，随时再用，缺点是步骤稍繁。(3) 培养细胞，800g离心10分钟收集培养细胞，用吸头或针头拨出细胞沉淀块，放入OCT包埋剂内。 避免采用降低组织冰点的甲醇乙醇固定。本产品说明书不提供关于组织取材、渗透、固定、冰冻切片等技术信息。用户应阅读冰冻切片机操作手册，参考各种常规技术方法。 使用方法 1. OCT包埋：用水或PBS冲洗固定的组织块，滤纸吸去液体。在盛标本的包埋模子内，挤出适量的包埋剂，放入组织和细胞沉淀块，加包埋剂完全埋没组织块。可用2层铝箔纸折叠成简易的模子。如有气泡可用针头或吸头吸出。 2. 冰冻：将盛有组织细胞和包埋剂的模子，正置于切片机冷室内冰冻10分钟。包埋剂呈乳白色固体。包埋剂和组织冷冻时体积略有膨胀，因此模子应正置，由底部向顶部进行冰冻。也可将OCT包埋的组织置于干冰或液氮，或放入－40~－70 ºC冰箱冰冻固化保存，用前取出置于切片机冷室内平衡温度(否则损坏刀)。 3. 切片：可在切片机的组织卡盘(chuck)上加少许包埋剂并在其固化前嵌入组织块，然后再于组织周围加入少许包埋剂稳定之。常规切片。厚度范围2~100 µm。 4. 收片后用适量水或PBS冲洗切片2−3分钟3次，洗除包埋剂。常规组化染色、病理染色、原位杂交。未用完的组织块可冷冻储存。 表一：新鲜组织的冰冻切片OCT温度。固定过的组织的OCT温度升高相应5~10°C 组织 °C 组织 °C 组织 °C 子宫刮出物 -7 肾 −15 子宫颈 −20 脑 −10 肺 −16 卵巢 −20 肝 −10 肌肉 −16 前列腺 −20 脾 −10 结蹄组织 −16 消化道 −20 睾丸 −10 皮肤 −16 骨髓 −20 甲状腺 −10 心 −18 连脂肪皮肤 −25 唇 −13 胰腺 −20 乳腺 −30 淋巴结 −15 子宫 −20 网膜脂肪 −35 通常折中采用−20°C。肝脑脾等组织的OCT切片温度应在−10 ºC，否则易碎。脂肪或含脂肪多的组织的OCT切片温度更低，否则易皱褶。 表二 常见问题 易碎 冷冻过快，或标本太大 组织、包埋块从支架脱落 包埋剂不足，组织在包埋剂中的位置过偏 组织向前推进但不能顺利切片 刀和组织未固定紧，刀的角度不合适，组织未完全冷冻 切片卷曲 Anti-roll plate不干净，切片太薄，刀钝 切片撕裂 组织过分冷冻，刀口受损、不洁 切片融化 冷室和刀的温度不正确 刀上有雾 切片机开盖时间过长 切片粘在 anti-roll plate 温度不正确，anti-roll plate不洁 切片歪向一侧 刀口钝、受损，anti-roll plate受损 切片从玻片脱落 没用玻片粘附剂，切的是固定组织、脂肪含量高的标本，操作粗糙 切片水平裂痕 切片时标本太冷