葡萄糖测定试剂盒
W1004-200次
描述：葡萄糖为组织细胞提供能量。生理性饥饿、剧烈运动、营养不良状态血糖降低，肥胖、糖尿病等疾病血糖升高。试剂盒采用葡萄糖氧化酶法，是世界卫生组织和中国《全国临床检验操作规程》推荐的临床血糖检测方法。经过改良使灵敏度比普通方法提高约10倍至5~10µmol/L，线性范围10~20000 µmol/L。可检测血液、食品饮料，以及组织细胞内低浓度葡萄糖含量，胜任各种临床和基础实验测量。
原理：根据Trinder反应原理1,2，葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢(H2O2)；然后用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢，使色原物质(4-氨基安替比林)生成醌亚胺，颜色的深浅与葡萄糖浓度成正比。
用途：测定人及动物血清、血浆、脑脊液、组织细胞孵育液及其裂解液等样品中的葡萄糖含量。尿液葡萄糖测定推荐使用“邻甲苯胺(o-Toluidine)法试剂盒#E1011”。
组成 (205次微量检测, 50次1ml检测)：(1) 0.5 ml葡萄糖标准品10 mmol/L (等于180 mg/100 ml)；(2) 32 ml试剂R1；(3) 8 ml试剂R2。常温运输。到达后避光4 ºC保存3月。
所需设备：721、722型可见光分光光度计、酶标仪、生化分析仪。最佳工作波长550-555nm，如仪器无此波长建议优先选用570、530、490nm。比色杯光径1cm。
配制工作溶液：按4:1比例，取8 ml试剂R1，与2 ml试剂R2混合得到10 ml 工作溶液。当天使用或4ºC保存1周。
标准品稀释：10 mM葡萄糖标准品用蒸馏水或与样本缓冲液一致的液体稀释为2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625µM。注意设置0浓度对照反应管。由于葡萄糖测定反应的线性关系甚好且范围很宽，通常设置黑体标记的4管即可，不需要设置> 2~10mM的标准管，以此得到的标准曲线用来>2 mM葡萄糖浓度通常不会失真。世界卫生组织(WHO)推荐也可仅设置单一浓度的标准管。不能使用用户自己简单配制的葡萄糖标准溶液。
三、测定操作：
1. 参见下表加样。先加标准品或待测样品，后加工作溶液。可依据葡萄糖浓度高低微量调整样品与工作液体积比例。超出线性范围可适当稀释。
2. 37ºC 20min (15~30min)。或25ºC室温反应30 min但灵敏度略降。反应平衡后颜色在60 min内稳定。
3. 先用蒸馏水空白管调零，然后测定各管OD550或570nm值。
4. 绘制标准曲线并计算葡萄糖浓度。Excel作图步骤：各标准管OD值为y轴，浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据，点击做图向导，选择-散点图-，点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点，点击-添加趋势线-，点击-选项-，点击-显示公式-和-R2值-。
5. 如果仅用单一标准管：葡萄糖浓度(mmol/L) = 标准品浓度 × (样品OD－空白OD) / (标准管OD－空白管OD)。
加样与测定表(可微量调整样品与工作液体积比例)
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微板测试，反应体积200μl |
比色杯测试，反应体积800 μl |
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空白管 |
标准管 |
测定管 |
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空白管 |
标准管 |
测定管 |
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蒸馏水μl |
5 |
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蒸馏水μl |
20 |
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标准品μl |
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5 |
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标准品μl |
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20 |
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标品 μl |
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5 |
标品 μl |
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20 |
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工作溶液μl |
195 |
195 |
195 |
工作溶液μl |
780 |
780 |
780 |
说明：
1. 人空腹血糖参考值3.89-6.11 mmol/L (70-110 mg/dl)，低血糖症临界水平2.7-3.89 mmol/L，高血糖症临界水平6.11-7.22 mmol/L。不同单位之间的换算公式：1 mmol/L = 0.0555 mg/100 ml (dL)；1 mmol/L × 18 = 1 mg/100 ml (dL)。
2. 检测线性范围0.02~20 mmol/L。浓度超过20 mmol/L用蒸馏水或生理盐水稀释1-2倍后测量。批内变异系数为0.7~2.0%，批间变异系数为~2%。准确度与精密度达到临床检测要求。
3. 不能直接测定尿液葡萄糖含量。尿液中尿酸浓度比较高，会消耗葡萄糖氧化酶反应中产生的过氧化氢，降低呈色反应，从而引起负误差使结果偏低。还原性物质如尿酸、抗坏血酸、胆红质、谷胱甘肽可竞争消耗反应产生的过氧化氢，使测定结果偏低。含强还原剂如二硫苏糖醇、巯基乙醇样品不建议使用本法。本法反应终体系可容忍的干扰物质最高浓度：血红蛋白10 g/L，黄疽标本胆红素340 μmol/L，氟化钠3 g/L。尿素46.7 mmol/L (280 mg/dl)，尿酸2.95 mmol/L (50 mg/dl)，肌酐4.42 mmol/L (50 mg/dl)，半胱氨酸50 mg/dl，甘油三酯500 mg/dl。
4. 《全国临床检验操作规程》指明测定血糖用草酸钾-氟化钠抗凝：每5ml血液加0.2 ml 6%草酸钾-4%氟化钠；其优点是抑制糖酵解和分解，测得的葡萄糖浓度更接近真实；缺点是干扰其它生化检查项目。枸椽酸钠抗凝剂易引起溶血，也干拢许多生化检查项目。如必须用同一份标本做全套生化检测，可采用肝素钠抗凝剂。
5. 血样应在在30分钟内完成测定。血清或血浆仍含大量血细胞，室温下糖酵解旺盛可消耗葡萄糖使测量值降低。室温放置1小时葡萄糖含量开始降低，3小时后明显下降。4 ºC保存血样葡萄糖稳定性明显增加。使用血浆测定葡萄糖浓度可能更接近真实浓度。相比之下用血清标本测得的葡萄糖浓度偏低，且随着样品放置时间延长而明显下降。
6. 细胞培养基上清应2000g离心10分钟，取去除细胞的上清测定。
参考文献：
1. Trinder, P. (1969). Annals of Clin. Biochem. 6: 24 – 27.
Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145
描述：葡萄糖为组织细胞提供能量。生理性饥饿、剧烈运动、营养不良状态血糖降低，肥胖、糖尿病等疾病血糖升高。试剂盒采用葡萄糖氧化酶法，是世界卫生组织和中国《全国临床检验操作规程》推荐的临床血糖检测方法。经过改良使灵敏度比普通方法提高约10倍至5~10µmol/L，线性范围10~20000 µmol/L。可检测血液、食品饮料，以及组织细胞内低浓度葡萄糖含量，胜任各种临床和基础实验测量。
原理：根据Trinder反应原理1,2，葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢(H2O2)；然后用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢，使色原物质(4-氨基安替比林)生成醌亚胺，颜色的深浅与葡萄糖浓度成正比。
用途：测定人及动物血清、血浆、脑脊液、组织细胞孵育液及其裂解液等样品中的葡萄糖含量。尿液葡萄糖测定推荐使用“邻甲苯胺(o-Toluidine)法试剂盒#E1011”。
组成 (205次微量检测, 50次1ml检测)：(1) 0.5 ml葡萄糖标准品10 mmol/L (等于180 mg/100 ml)；(2) 32 ml试剂R1；(3) 8 ml试剂R2。常温运输。到达后避光4 ºC保存3月。
所需设备：721、722型可见光分光光度计、酶标仪、生化分析仪。最佳工作波长550-555nm，如仪器无此波长建议优先选用570、530、490nm。比色杯光径1cm。
配制工作溶液：按4:1比例，取8 ml试剂R1，与2 ml试剂R2混合得到10 ml 工作溶液。当天使用或4ºC保存1周。
标准品稀释：10 mM葡萄糖标准品用蒸馏水或与样本缓冲液一致的液体稀释为2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625µM。注意设置0浓度对照反应管。由于葡萄糖测定反应的线性关系甚好且范围很宽，通常设置黑体标记的4管即可，不需要设置> 2~10mM的标准管，以此得到的标准曲线用来>2 mM葡萄糖浓度通常不会失真。世界卫生组织(WHO)推荐也可仅设置单一浓度的标准管。不能使用用户自己简单配制的葡萄糖标准溶液。
三、测定操作：
1. 参见下表加样。先加标准品或待测样品，后加工作溶液。可依据葡萄糖浓度高低微量调整样品与工作液体积比例。超出线性范围可适当稀释。
2. 37ºC 20min (15~30min)。或25ºC室温反应30 min但灵敏度略降。反应平衡后颜色在60 min内稳定。
3. 先用蒸馏水空白管调零，然后测定各管OD550或570nm值。
4. 绘制标准曲线并计算葡萄糖浓度。Excel作图步骤：各标准管OD值为y轴，浓度为x轴。(1)鼠标左键圈住数据，点击做图向导，选择-散点图-，点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一点，点击-添加趋势线-，点击-选项-，点击-显示公式-和-R2值-。
5. 如果仅用单一标准管：葡萄糖浓度(mmol/L) = 标准品浓度 × (样品OD－空白OD) / (标准管OD－空白管OD)。
加样与测定表(可微量调整样品与工作液体积比例)
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微板测试，反应体积200μl |
比色杯测试，反应体积800 μl |
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空白管 |
标准管 |
测定管 |
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空白管 |
标准管 |
测定管 |
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蒸馏水μl |
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蒸馏水μl |
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标准品μl |
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标准品μl |
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标品 μl |
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标品 μl |
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工作溶液μl |
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工作溶液μl |
780 |
780 |
780 |
说明：
7. 人空腹血糖参考值3.89-6.11 mmol/L (70-110 mg/dl)，低血糖症临界水平2.7-3.89 mmol/L，高血糖症临界水平6.11-7.22 mmol/L。不同单位之间的换算公式：1 mmol/L = 0.0555 mg/100 ml (dL)；1 mmol/L × 18 = 1 mg/100 ml (dL)。
8. 检测线性范围0.02~20 mmol/L。浓度超过20 mmol/L用蒸馏水或生理盐水稀释1-2倍后测量。批内变异系数为0.7~2.0%，批间变异系数为~2%。准确度与精密度达到临床检测要求。
9. 不能直接测定尿液葡萄糖含量。尿液中尿酸浓度比较高，会消耗葡萄糖氧化酶反应中产生的过氧化氢，降低呈色反应，从而引起负误差使结果偏低。还原性物质如尿酸、抗坏血酸、胆红质、谷胱甘肽可竞争消耗反应产生的过氧化氢，使测定结果偏低。含强还原剂如二硫苏糖醇、巯基乙醇样品不建议使用本法。本法反应终体系可容忍的干扰物质最高浓度：血红蛋白10 g/L，黄疽标本胆红素340 μmol/L，氟化钠3 g/L。尿素46.7 mmol/L (280 mg/dl)，尿酸2.95 mmol/L (50 mg/dl)，肌酐4.42 mmol/L (50 mg/dl)，半胱氨酸50 mg/dl，甘油三酯500 mg/dl。
10. 《全国临床检验操作规程》指明测定血糖用草酸钾-氟化钠抗凝：每5ml血液加0.2 ml 6%草酸钾-4%氟化钠；其优点是抑制糖酵解和分解，测得的葡萄糖浓度更接近真实；缺点是干扰其它生化检查项目。枸椽酸钠抗凝剂易引起溶血，也干拢许多生化检查项目。如必须用同一份标本做全套生化检测，可采用肝素钠抗凝剂。
11. 血样应在在30分钟内完成测定。血清或血浆仍含大量血细胞，室温下糖酵解旺盛可消耗葡萄糖使测量值降低。室温放置1小时葡萄糖含量开始降低，3小时后明显下降。4 ºC保存血样葡萄糖稳定性明显增加。使用血浆测定葡萄糖浓度可能更接近真实浓度。相比之下用血清标本测得的葡萄糖浓度偏低，且随着样品放置时间延长而明显下降。
12. 细胞培养基上清应2000g离心10分钟，取去除细胞的上清测定。
参考文献：
2. Trinder, P. (1969). Annals of Clin. Biochem. 6: 24 – 27.
Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145
